Тест-системи для виявлення мікробіологічного забруднення в харчових продуктах, сировині, кормах і воді методом ПЛР у реальному часі — це готові набори реагентів і матеріалів, призначені для швидкого, точного і специфічного виявлення ДНК або РНК патогенних мікроорганізмів (бактерій, вірусів, паразитів) у різних типах зразків за допомогою кількісної ПЛР (qPCR).
Суть методу ПЛР у реальному часі
Метод ПЛР у реальному часі (real-time PCR, або qPCR) дозволяє:
- Ампліфікувати (розмножити) специфічні ділянки ДНК мікроорганізмів, якщо вони присутні у зразку;
- Одночасно відстежувати процес ампліфікації в реальному часі завдяки флуоресцентним міткам;
- Кількісно оцінити рівень забруднення (кількість копій ДНК).
Що входить до складу тест-системи
Тест-системи зазвичай включають:
| Компонент | Призначення |
|---|---|
| Mastermix | Готова суміш ферментів, дезоксинуклеотидів, буферу |
| Primers & Probes | Праймери і зонди, специфічні до цільового мікроорганізму |
| Контрольні зразки | Позитивний контроль (містить цільову ДНК), негативний контроль (без ДНК), іноді — контроль екстракції |
| AC (внутрішній контроль) | Контроль на інгібітори або помилки ампліфікації |
| Інструкція | Стандартизований протокол використання |
| Додаткові реагенти | Розчинники, буфери, SureXtra, DigiCount (у просунутих системах) |
Цілі використання
Використовуються для контролю якості на підприємствах:
- Харчова промисловість (м’ясо, молоко, риба, овочі, фрукти, готові страви);
- Виробники кормів;
- Водопостачальні підприємства;
- Санітарно-епідеміологічні служби;
- Лабораторії ветеринарного та санітарного контролю.
Типові патогени, які виявляють:
| Група | Приклади патогенів |
|---|---|
| Бактерії | Salmonella, Listeria, E. coli O157, Campylobacter, Shigella, Legionella |
| Віруси | Норовіруси, ротавіруси (у воді та харчах) |
| Паразити | Cryptosporidium, Giardia |
| Дріжджі/гриби | Brettanomyces (псування вина) |
Переваги методу ПЛР у реальному часі:
| Перевага | Пояснення |
|---|---|
| ⏱ Швидкість | Результат за 1–2 години після екстракції ДНК |
| 🎯 Специфічність | Виявляється лише потрібний збудник |
| 🔬 Чутливість | Виявлення навіть 10–100 копій ДНК |
| 📊 Кількісний результат | Дає змогу оцінити рівень контамінації |
| ⚙ Автоматизація | Можлива з використанням ПЛР‑станцій |
| 🔁 Універсальність | Придатні для різних типів зразків (вода, їжа, корми, сировина) |
Використання на практиці
- Підготовка зразка: гомогенізація, попереднє збагачення (опційно), екстракція ДНК.
- Підготовка реакції: змішування реагентів згідно з інструкцією.
- Запуск на ПЛР-ампліфікаторі: стандартна програма (95°C, 60°C тощо).
- Інтерпретація: згідно зі значенням Ct (Cycle threshold). Нижчий Ct — більше ДНК патогена.
Приклади комерційних тест-систем
- PATHfinder (Generon)
- iQ‑Check (Bio-Rad)
- foodproof (BIOTECON Diagnostics)
- SureFast® (R-Biopharm)
- MicroSEQ® (Thermo Fisher)
- Greenlight® qPCR (Merck Millipore)
Чому це важливо?
- Забезпечує безпеку продуктів харчування і води;
- Дозволяє виявити зараження до прояву симптомів у споживачів;
- Відповідає міжнародним стандартам контролю якості (ISO, HACCP, GFSI);
- Забезпечує швидке реагування підприємства у разі виявлення патогену.